Reverse vaccinology and subtractive genomics approaches for identifying common therapeutics against Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis

Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis are gram-positive bacterial pathogens and the causative agents of leprosy in humans across the world. The elimination of leprosy cannot be achieved by multidrug therapy alone, and highlights the need for new tools and drugs to prevent the emergence of new resistant strains. Methods In this study, our contribution includes the prediction of vaccine targets and new putative drugs against leprosy, using reverse vaccinology and subtractive genomics. Six strains of Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis (4 and 2 strains, respectively) were used for comparison taking Mycobacterium leprae strain TN as the reference genome. Briefly, we used a combined reverse vaccinology and subtractive genomics approach. Results As a result, we identified 12 common putative antigenic proteins as vaccine targets and three common drug targets against Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis. Furthermore, the docking analysis using 28 natural compounds with three drug targets was done. Conclusions The bis-naphthoquinone compound Diospyrin (CID 308140) obtained from indigenous plant Diospyros spp. showed the most favored binding affinity against predicted drug targets, which can be a candidate therapeutic target in the future against leprosy.(AU)

Hanseníase neural, aspectos diagnósticos da forma neural pura e mecanismos imunopatogênicos da lesão do nervo na doença. Participação de quimiocinas CCL2 e CXCL10 e metaloproteinases 2 e 9 / Neural leprosy, pure neural leprosy diagnosis and imunopatogenic mechanisms of nerve damage during the disease. Participation of chemokines CCL2 and CXCL10) and metalloproteinases 2 and 9

O diagnóstico da hanseníase neural pura baseia-se em dados clínicos e laboratoriais do paciente, incluindo a histopatologia de espécimes de biópsia de nervo e detecção de DNA de Mycobacterium leprae (M. leprae) pelo PCR. Como o exame histopatológico e a técnica PCR podem não ser suficientes para confirmar o diagnóstico, a imunomarcação de lipoarabinomanana (LAM) e/ou Glicolipídio fenólico 1 (PGL1) - componentes de parede celular de M. leprae foi utilizada na primeira etapa deste estudo, na tentativa de detectar qualquer presença vestigial do M. leprae em amostras de nervo sem bacilos. Além disso, sabe-se que a lesão do nervo na hanseníase pode diretamente ser induzida pelo M. leprae nos estágios iniciais da infecção, no entanto, os mecanismos imunomediados adicionam severidade ao comprometimento da função neural em períodos sintomáticos da doença. Este estudo investigou também a expressão imuno-histoquímica de marcadores envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do dano ao nervo na hanseníase. Os imunomarcadores selecionados foram: quimiocinas CXCL10, CCL2, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, e metaloproteinases 2 e 9. O estudo foi desenvolvido em espécimes de biópsias congeladas de nervo coletados de pacientes com HNP (n=23 / 6 BAAR+ e 17 BAAR - PCR +) e pacientes diagnosticados com outras neuropatias (n=5) utilizados como controle. Todas as amostras foram criosseccionadas e submetidas à imunoperoxidase. Os resultados iniciais demonstraram que as 6 amostras de nervos BAAR+ são LAM+/PGL1+. Já entre as 17 amostras de nervos BAAR-, 8 são LAM+ e/ou PGL1+. Nas 17 amostras de nervos BAAR-PCR+, apenas 7 tiveram resultados LAM+ e/ou PGL1+. A detecção de imunorreatividade para LAM e PGL1 nas amostras de nervo do grupo HNP contribuiu para a maior eficiência diagnóstica na ausência recursos a diagnósticos moleculares...

The diagnosis of pure neural leprosy (PNL) is based on clinical and laboratory data, including the histopathology of nerve biopsy specimens and detection of M. leprae DNA by polymerase chain reaction (PCR). Given that histopathological examination and PCR methods may not be sufficient to confirm diagnosis, immunolabeling of lipoarabinomanan (LAM) and/or phenolic glycolipid 1 (PGL1) M. leprae wall components were utilized in the first step of this investigation in an attempt to detect any vestigial presence of M. leprae in AFB- nerve samples. Furthermore, it´s well known that nerve damage in leprosy can be directly induced by Mycobacterium leprae in the early stages of infection; however, immunomediated mechanisms add gravity to the impairment of neural function in symptomatic periods of the disease. Therefore, this study also investigated the immunohistochemical expression of immunomarkers involved in the pathogenic mechanisms of leprosy nerve damage. These markers selected were CXCL10, CCL2 chemokines and CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, metalloproteinases 2 and 9 in nerve biopsy specimens collected from leprosy (23) and nonleprosy patients (5) suffering peripheral neuropathy. Twenty-three PNL nerve samples (6 AFB+ and 17 AFB-PCR+) were cryosectioned and submitted to LAM and PGL1 immunohistochemical staining by immunoperoxidase; 5 nonleprosy nerve samples were used as controls. The 6 AFB-positive samples showed LAM/PGL1 immunoreactivity. Among the 17 AFB- samples, only 8 revealed LAM and/or PGL1 immunoreactivity. In 17 AFB-PCR+ patients, just 7 had LAM and/or PGL1-positive nerve results. In the PNL cases, the detection of immunolabeled LAM and PGL1 in the nerve samples would have contributed to enhanced diagnostic efficiency in the absence of molecular diagnostic facilities...

Case report of a histoid leprosy patient

Histoid leprosy is one of the rare kinds of lepromatous leprosy with specific clinical pathologic manifestations. It is most commonly observed in patients who have been under long-term single drug therapy with dapsone. Clinical manifestations mostly consist of red papules and nodules and pathologic examination there are spindle like histiocytes. Following acid-fast staining, abundant bacilli can be seen. Significance of these patients is due to their rarity, atypicality of dermal lesions, failure in early diagnosis, and high bacillus load which can be a barrier in the eradication of the disease and act as a potential source of infection in areas where the disease has been eradicated. Our case showed up with plentiful dermal papules and nodules from two years ago which caused no discomfort. He had a history of leprosy 25 years ago and had been treated only with dapsone for 3 years. Therefore, the diagnosis of histoid type lepromatous leprosy was made and confirmed based on clinical and histopathological findings.

Mycobacterium leprae virulence-associated peptides are indicators of exposure to M: leprae in Brazil, Ethiopia and Nepal

Silent transmission of Mycobacterium leprae, as evidenced by stable leprosy incidence rates in various countries, remains a health challenge despite the implementation of multidrug therapy worldwide. Therefore, the development of tools for the early diagnosis of M. leprae infection should be emphasised in leprosy research. As part of the continuing effort to identify antigens that have diagnostic potential, unique M. leprae peptides derived from predicted virulence-associated proteins (group IV.A) were identified using advanced genome pattern programs and bioinformatics. Based on human leukocyte antigen (HLA)-binding motifs, we selected 21 peptides that were predicted to be promiscuous HLA-class I T-cell epitopes and eight peptides that were predicted to be HLA-class II restricted T-cell epitopes for field-testing in Brazil, Ethiopia and Nepal. High levels of interferon (IFN)-γ were induced when peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from tuberculoid/borderline tuberculoid leprosy patients located in Brazil and Ethiopia were stimulated with the ML2055 p35 peptide. PBMCs that were isolated from healthy endemic controls living in areas with high leprosy prevalence (EChigh) in Ethiopia also responded to the ML2055 p35 peptide. The Brazilian EChigh group recognised the ML1358 p20 and ML1358 p24 peptides. None of the peptides were recognised by PBMCs from healthy controls living in non-endemic region. In Nepal, mixtures of these peptides induced the production of IFN-γ by the PBMCs of leprosy patients and EChigh. Therefore, the M. leprae virulence-associated peptides identified in this study may be useful for identifying exposure to M. leprae in population with differing HLA polymorphisms.

Prevalência de infecção pelo Mycobacterium leprae na população da microrregião de Almenara - Minas Gerais / Prevalence of infection by Mycobacterium leprae in the population of the microregion of Almenara, Minas Gerais

O PGL-I, antígeno de superfície do Mycobacterium leprae, é responsável pela ativação da resposta imunológica nos indivíduos que entram em contato com o bacilo. Os testes sorológicos anti PGL-I são utilizados como ferramenta para identificação de indivíduos expostos, com infecção subclínica ou com risco de adoecerem e quando associados à clínica podem auxiliar no diagnóstico da hanseníase, além de serem úteis para a classificação da forma clínica, pois apresentam alta sensibilidade nos pacientes multibacilares. A prevalência de soropositividade do teste pode refletir aproximadamente a taxa de exposição/infecção em uma população. O objetivo do estudo foi analisar a prevalência da infecção pelo M. leprae na população da Microrregião de Almenara, Minas Gerais. Para tanto, optou-se por estudo epidemiológico, do tipo survey, com uma amostra de 2726 indivíduos selecionados, aleatoriamente, a partir da estratificação dos setores censitários segundo quartis de taxa média de detecção, nos municípios de Almenara, Felisburgo, Jacinto, Jequitinhonha, Monte Formoso, Ponto dos Volantes, Santa Maria do Salto e Santo Antônio do Jacinto. Foram realizadas visitas domiciliares para aplicação de questionário estruturado para a obtenção de dados sócio-demográficos, de condições de moradia, de contato com doentes de hanseníase e de imunoprofilaxia, sendo também realizada coleta de sangue em papel filtro para análise anti PGL-I. O método imunoenzimático utilizado para análise sorológica foi o ELISA. O estudo foi aprovado pelo COEP-UFMG parecer nº ETIC 158/09 e atende às determinações da Resolução 196/96 do Conselho Nacional de Saúde. Os dados foram lançados no Epi Info v. 3.5.1 e analisados no software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) for Windows 18. Obteve-se soroprevalência média de anti PGL-I de 1,03% e verificou-se associação estatística entre a variável idade e a soropositividade anti PGL-I, sendo que os indivíduos com idade entre 15 e 29 anos apresentam...

The PGL-I surface antigen of Mycobacterium leprae, is responsible for activation of the immune response in individuals who come into contact with the bacillus. The serological anti PGL-I tests are used as a tool for identification of exposed individuals with subclinical infection or risk of disease and when associated to the clinic can help in the diagnosis of leprosy, besides they are useful for classifying the clinical form, since they have high sensitivity in multibacillary patients. The prevalence of seropositivity of the test may reflect approximately the rate of exposure / infection in a population. The purpose of this study was to analyze the prevalence of infection with M. leprae in the population of the microregion of Almenara, Minas Gerais. Hence, we opted for an epidemiological study, survey type, with a sample of 2726 individuals, randomly selected, from the stratification of census tracts, the second quartile, of average detection rate in the municipalities of Almenara, Felisburgo, Jacinto, Jequitinhonha, Monte Formoso, Ponto dos Volantes, Santa Maria do Salto e Santo Antônio do Jacinto. We carried out home visits to the enforcement of a structured questionnaire to obtain socio-demographic data, housing conditions, contact with patients of leprosy and of immunoprophylaxis, being also performed blood collection on filter paper for analysis of anti PGL-I. The immunoenzymatic method used for serological analysis was ELISA. The study was approved by the COEP-UFMG opinion nº ETIC 158/09 and meets the provisions of Resolution 196/96 of the National Health Council. The data entered into Epi Info v. 3.5.1 and analyzed using the Statistical Package for the Social Sciences 18 (SPSS) for Windows. We obtained an average seroprevalence of anti PGL-I of 1.03% and there was statistical association between age and anti PGL-I seropositivity, given that individuals aged between 15 and 29 years have approximately three times greater chance...

Enxertos tipo punch graft para tratamento de ulceras de membros inferiores em pacientes de hanseniase tratados / ?

A hanseniase e uma doença infecciosa, milenar, causada pelo Mycobacterium leprae. Afeta, preferncialmente a pele e o sistema nervoso periferico, provocando incapacidades, seja por atuaçao direta do bacilo sobre os tecidos ou indireta pela açao sobre o sistema nervoso periferico. Entre as incapacidades, estao as ulceras de membros inferiores, que podem ocorrer por dois processos fisiopatologicos. Existem diversos tipos de tratamento para ulceras de membros inferiores de forma geral, em que incluimos as causadas por sequelas de hanseniase. Entre eles, o tratamento cirurgico por meio de enxertos de pele, que podem ser realizados por diversas tecnicas, mostra-se efetivo. Considerando a escassez de abordagens para tratamento de ulceras de membros inferiores, em sequelas de hanseniase, os objetivos deste trabalho foram avaliar o perfil dos doentes e das ulceras, detectar as principais bacterias encontradas em culturas de secreçao das mesmas, descrever achados histopatologicos e padronizar tecnica alternativa para seu tratamento. Foram avaliados doentes de hanseniase tratados que possuiam ulceras de membros inferiores onde foram realizados enxertos de pele tipo punch. Quatorze doentes eram do sexo masculino, cinco do feminino, com media de idade de 59,4 anos no sexo masculino e de 54,2 anos no sexo feminino, 89,4 por cento dos doentes foram tratados de hanseniase tipo virchoviano e 10,5 por cento do tipo tuberculoide, 26,3 por cento dos mesmos apresentavam doenças sistemicas associadas...

Current epidemiology of leprosy.

Every year around 4,00,000 new cases of leprosy occur in India and India contributes about 80% of the global leprosy case load. The prevalence of leprosy (case load per 1,00,000 population) has come down from 52 per 10,000 in 1981 to 2.4 per 10,000 in July 2004. There is no primary prevention for leprosy. Multidrug therapy is the only intervention available against the disease. As of July 2004 there were about 2,40,000 leprosy cases on record in India. There are thirteen states and union territories in India which have already eliminated leprosy. About 70% of the cases detected in India are paucibacillary which are less or non-infectious. Ever since the start of National Leprosy Eradication Programme in 1983, the number of new cases detected every year has not shown significant change. Leprosy cases are treated for 6 months or 12 months depending on whether they are PB or MB. The treatment completion rates are now found to be 85% for MB and 90% for PB. Phased introduction of MDT services has contributed to a large extent the static level of new case detection. Without complete coverage of MDT, it is difficult to achieve stable level of new case detection. Diagnostic efficiency of the staff is very important external factor influencing case detection rate. The most important factor that could have significant impact or prevalence is the coverage of the entire population with adequate MDT service.

Soroprevalencia para hanseniase em areas endemicas do estado do Para / Soroprevalence for leprosy in endemic areas of the state of Para

Analisou-se a prevalencia de anticoepos IgM utilizando teste sorologico e antigeno especifico Glicolipidio Fenolico I (PGL-I) do Mycobacterium leprae, por meio do teste rapido ML Dipstick em 1611 individuos sadios categorizados em contatos de pacientes hansenicos intradomiciliares e comunitarios, residentes em cinco municipios endemicos para hanseniase. Realizou-se estudo tranversal pela analise do banco de dados do laboratorio de hanseniase, Instituto Evandro Chagas. O estudo estendeu-se de março a dezembro de 1998, com reavaliaçoes anuais ate dezembro de 2002, no qual, os municipios selecionados-Curinopolis, Eldorado do Carajas, Xinguara, Rondon do Para e Dom Eliseu - apresentaram taxas de prevalencia em hanseniase maiores que 20 em cada 10.000 hab. e detecçao de casos novos maiores que quatro em cada 10.000 hab. A idade variou de 2 a 90 anos, devido ao fato de que a doença em areas de alta endemicidade possibilita o diagnostico de crianças. Estudou-se 957 mulheres (957/1611-59.4 por cento), 654 homens (654/1611-40.6 por cento) e observou-se predominancia de soropositividade entre as mulheres na faixa etaria entre 21 e 50 anos, 62.81 por cento contra 53.97 por cento nos homens. A analise foi realizada nos bancos de dados D-BASE, EPI-INFO 6.4 e 2002, BIOESTAT 3.0 e SINAM, existentes no Instituto Evandro Chagas e Secretaria Estadual de Saude do Para...

Pesquisa de Mycobacterium leprae em tatus selvagens da espécie Dasypus Novencintus do Estado do Espírito Santo / Mycobacterium leprae research in wild armadillos of the Dasypus novemcinctus specie from Espirito Santo state

Introducao: Realizou-se um estudo de prevalencia em 52 tatus selvagens da especie Dsypus novemcinctus, capturados no estado do Espirito Santo, no periodo de junho de 2000 a julho de 2001. Objetivos: Estudar a prevalencia da infeccao pelo Mycobacterium leprae e compara-la aos trabalhos publicados na literatura, bem como avaliar e comparar os metodos utilizados para deteccao da infeccao. Metodos: Apos anestesiados, os tatus foram pesados, determinado o sexo, submetidos a exame clinico e coleta de fragmento de orelha para estudos histopatologicos (hematoxilina-eosina e Ziehl-Neelsen), imunohistoquimicos com anti-BCG, e fragmentos de orelha, pele, pata e lesao cutanea para a tecnica de PCR. Vinte tres tatus foram necropsiados e fragmentos de figado, baco, cerebro, pulmao, rim e intestino foram obtidos para a tecnica de PCR. Resultados e conclusoes: Nao foram evidenciadas lesoes de hansenomas e apenas um tatu apresentou linfadenomegalia palpavel na regiao inguinal dentre os 52 tatus examinados. Nao foi evidenciado quadro histopatologico compativel com nenhuma das formas de hanseniase pela coloracao de hematoxilina-eosina, e nao foi evidenciado presenca de BAAR pela tecnica de Ziehl-Neelsen, nem imunoexpressao do marcador BCG compativel com M. leprae. Foi detectada 10,6 porcento de soro-prevalencia de anticorpos IgM anti-PGL-I, e 11,9 porcento de positividade nas amostras de sangue, atraves da tecnica de PCR. Foi detectada 52,8 porcento de positividade na pesquisa de DNA de M. leprae nos fragmentos de tecidos (pele, orelha, lesao, pata, figado, baco, pulmao, cerebro, rim e intestino) atraves da tecnica de PCR. Dos tecidos testados, o cerebro foi o orgao onde mais se encontrou positividade pela tecnica de PCR (40,9 porcento), seguido da pele (22,2 porcento), orelha (20 porcento), pulmao (13,6 por cento), baco (13 porcento), pata (11,5 porcento), lesao cutanea (11,1 porcento), figado (8,7 porcento), rim (8,7 porcento) e intestino (4,5 porcento). O metodo diagnostico mais sensivel para deteccao de M. leprae foi o PCR dos tecidos, seguido do PCR do sangue e pesquisa de anticorpos anti-PGL-I atraves da tecnica de ELISA.

Lepra: evaluación inmunonológica de contactos intradomiciliarios / Leprosy: an assessment of contacts inmunonológica intradomiciliary

Los contactos intradomiciliarios de pacientes con lepra representan una población con riesgo de infección . El uso combinado de pruebas cutáneas y ELISA revela el grado de sensibilización, la capacidad de respuesta inmunológica y casos subclínicos de la enfermedad. Con base en lo anteriormente expuesto y con la finalidad de justificar el uso de estas pruebas, de rutina en otros contactos, se entrevistó el evaluó clínicamente a 211 contactos intradomiciliarios, de 32 casos de lepra registrados. Se colocó a los contactos lepramina intradérmica y se determinó niveles de anticuerpos específicos contra M. leprae (prueba de ELISA con PGL-1). De la población evaluada, 99.88 por ciento presentó reacción de Fernández negativa y 2/3 de ella presentó una reacción de Mitsuda positiva. Sólo 30.85 por ciento constituyó un grupo de riesgo por presentar reacción de Mitsuda negativa. Al correlacionar las pruebas cutáneas con el ELISA se mostró que ninguno presentaba lepra en fase subclínica y que un sólo caso de ELISA débilmente positivo resultó ser una infección pasada autolimitada. No se justifica usar todas las pruebas inmunológicas, en todos los contactos. Se recomienda usar pruebas cutáneas para detectar grupos de riesgo y para orientar quimiprofilaxis, reservado el uso del ELISA sólo para grupos de riesgo demostrado.

Hanseníase experimental murina: inoculaçäo do Mycobaterium leprae via intranasal / Murine experimental hansen's disease: intranasal inoculation of the mycobacterium leprae

Considerando as vias aéreas superiores como a mais provável porta de entrada do M.leprae no organismo, no presente estudo avaliou-se o comportamento do bacilo inoculado experimentalmente via intranasal. Assim, camondongos suiços foram inoculados por instilaçäo nasal com M.leprae e sacrificados em diferentes períodos de tempo. Em cada cada sacrifício os pulmöes foram removidos e submetidos ao lavado broncoalveolar (LBA) e análise histopatológica. O LBA foi avaliado quanto ao número de bacilos recuperados e número total e diferencial de células inflamatórias; foi ainda semeado em meios de cultivo Lowenstein-Jensen e Middlebrook 7H9 e 7H11. No LBA foram encontrados bacilos até o 6§ mês de inoculaçäo, näo houve crescimento de micobactérias nas culturas. O número total de células, linfócitos e neutrófilos do LBA obtido de camundongos infectados foi maior que o do grupo controle até o 6§ mês da experimentaçäo. A análise histopatológica revelou pequenos infiltrados celulares distribuídos pelo parênquima pulmonar e ao redor dos vasos até o 6§ mês de sacrifício; näo foram observadas lesöes de disseminaçäo. Os resultados obtidos revelam que a inoculaçäo de M. leprae, via intranasal, em camundongos Suíços, näo levou ao desenvolvimento da doença nem a multiplicaçäo dos bacilos; assim estudos aidcionais envolvendo outras linhagens de camundongos poderäo ser úteis para determinar a importância da via intranasal na infecçäo hansênica

Inoculaçao de Mycobacterium leprae na bolsa jugal do hamster / ?

A utilizaçao da bolsa jugal do hamster na hanseníase experimental, foi avaliada por meio da inoculaçao de 6,0x101 8 M. leprae/ml no seu tecido subepitelial em 60 animais, empregando como grupo de controle, 12 hamster inoculados no coxim plantar. Os animais foram sacrificados 20 e 48 horas e 7, 14, 21 e 28 dias p.i. A evoluçao da lesao de inoculaçao foi anlisada pelo exame histológico em cortes corados pela hematoxilinaeosina e Faraco-Fite. A avaliçao da viabilidade bacilar na bolsa jugal do hamster foi realizada 7, 14, 21 e 28 dias p.i. pelo teste de recuperaçao dos bacilos em camundongos. Os resultados nos permitiram concluir que: a) a resposta inflamatória inicial ao M. leprae na bolsa jugal foi exsutativa e inespecífica, com duraçao curta;

Expression and cytokine secretion in the states of immune reactivation in leprosy

Leprosy is a chronic inflammatory disease caused by Mycobacterium leprae. The human response to this pathogen exhibits intriguing aspects which are up to now not well understood. The present study discusses the probable mechanisms involved in T cell-specific unresponsiveness observed in lepromatous patients. Analysis of the cytokine profile either in blood leukocytes or in skin specimens taken from leprosy lesions indicates that some parameters of Th1 immune response are present in lepromatous patients under reactional states.

Aspectos estatísticos da hanseníase no município de Petrópolis / Statistical aspects of hanseníase in municipal district of Petrópolis

A hanseníase, ou doença de Hansen, ainda é interpretada como um grande problema de Saúde Pública, porque o manuseio do paciente requer cuidados contínuos e freqüentes de todos os profissionais envolvidos. Em função deste problema, o município de Petrópolis - através do Laboratório de Saúde Pública Dr. Germano B. Bretz - está desenvolvendo, pesquisando e dando continuidade ao tratamento do paciente portador. Todos estes fatores são apresentados neste artigo.

Leprosy or Hansen's disease is stil interpreted as a big problems in public health, because the handing of patient requires continuous and frequent cares of all professionals involved in function of this problems, the Municipaly of Petrópolis, through Dr. Germano B. Bretz Public Health Laboratory, is developping, researching and giving continuity on treatment of porter patient. All of these aspects are present in the work.

Utilización de cultivos de células de Schwann para el estudio de la infección in vitro con Mycobacterium leprae / Use of Schwann cell cultures in the study of Mycobacterium leprae in vitro infection

Mycobacterium leprae es un patógeno intracelular con marcada afinidad por células de Schwann (CS) y macrófagos del sistema reticuloendotelial, que causa una neuropatía periférica en el hombre. Es un microorganismo no cultivable en medios convencionales y numerosos intentos por cultivarlo han sido infructuosos. Los modelos animales utilizados, han sido los de elección, entre estos el del cojinete plantar del ratón que es la prueba oro utilizada en el diagnóstico y el estudio de la patogenesis de la enfermedad, la viabilidad y la resistencia a antibióticos por parte del M. leprae. Conociendo que todos los tipos de lepra (LL,LT, etc.) cursan con una lepra de tipo neural, consideramos que un modelo in vitro de CS de ratón permitiría una gran aproximación al estudio de la interacción del M. leprae y su célula blanco específica en la infección, la cual se puede obtener en cultivo, conservando propiedades morfológicas y funcionales tales como es su capacidad de asociación con neuritas. Aunque las CS comprenden el 90 por ciento de la población inicial en cultivos de ganglios de raíz dorsal (DRG), su número declina debido a la rápida rata mitótica de los fibroblastos en presencia de suero fetal bovino. Sin embargo el tratamiento de los cultivos con agentes activadores del AMP cíclico inhiben el crecimiento de fibroblastos sin causar toxicidad a la CS, permitiendo su proliferación y enriquecimiento. Utilizando un tratamiento con agentes activadores del AMPc se obtuvieron cultivos enriquecidos en células de Schwann, lo cual fue corroborado por recuentos basados en sus características morfológicas y su inmunoreactividad al anticuerpo dirigido contra la proteína S-100, una proteína reguladora de la concentración de calcio intracelular, asociada a filamentos intermedios, presente en la célula de Schwann y ausente en los fibroblastos. Obtuvimos cultivos con un 88 por ciento de células de Schwann los cuales han sido usados en los ensayos de infección. Para la infección de células de Schwann por el Mycobacterium leprae, se utilizó la técnica recomendada por la O.M.S. de obtención y cuantificación de los bacilos a partir de lepromas obtenidos de pacientes con lepra lepromatosa no tratados. Cultivos enriquecidos en células de Schwann se incubaron con este M. leprae y se realizaron estudios morfológicos por microscopía óptica, usando la coloración de Zielh Neelsen caliente cuantificando el número de bacilos por célula y el porcentaje de células infectadas, estudios de...